Salmonella Stuhl

Keul-o-test^®

Salmonella spp.

KGST301

Ein schneller Ein-Schritt-Test für den qualitativen Nachweis von Salmonella spp. in Fäces. Nur für den professionellen Gebrauch in der In vitro-Diagnostik.

Verwendungszweck
Der Salmonella-Test ist ein immunchromatographischer, farbiger Ein-Schritt-Test für den qualitativen Nachweis von Salmonella spp. in Stuhlproben. Der Test dient zum Nachweis von Salmonellose bei infizierten Personen.

Zusammenfassung
Die von einer Salmonella enterica-Infektion verursachten klinischen Syndrome im Menschen werden unterschieden in Typhus (verursacht durch S. enterica serovars typhi und paratyphi) sowie eine Reihe weiterer klinischer Syndrome, einschließlich der durch nicht typhoide Salmonellae (NTS) verursachten Durchfallerkankungen. Von den nicht typhoiden Salmonellae existieren circa 2500 Serovare. Bei Typhus handelt es sich um eine ausschließlich humanpathogene und hoch angepasste, invasive systemische Erkrankung bei Erwachsenen und Kindern, bei der nur ein geringer Zusammenhang mit einem geschwächten Immunsystem besteht. Im Gegensatz dazu verfügen NTS innerhalb der Wirbeltiere über ein breites Wirtsspektrum. Zumindest in Industrienationen, in denen sich NTS in der Regel als Gastroenteritis manifestiert, umfasst die Epidemiologie von NTS häufig zur Nahrungsmittelproduktion verwendete Nutztiere. Durch NTS verursachte schwere, invasive Erkrankungen sind normalerweise mit einer Schwächung des Immunsystems assoziiert, wie sie gewöhnlich in HIV-infizierten Erwachsenen auftritt. Invasive NTS-Erkrankungen treten darüber hinaus oftmals in afrikanischen Kindern mit Komorbiditäten wie beispielsweise schwerer Anämie, Mangelernährung und HIV-Infektion auf.
Der vorliegende Salmonella-Test ermöglicht einen raschen Nachweis von Salmonella spp. direkt aus Fäces-Proben.

Prinzip
Der Salmonella-Test ist ein qualitativer Immunassay für den Nachweis von Salmonella in Fäcesproben. Die Membran der Testvorrichtung ist im Bereich der Testbande mit Antikörpern gegen Salmonella-Antigen vorbeschichtet. Während der Testdurchführung reagiert die Probe mit den farbigen Latex-Partikeln, die mit anti-Salmonella-Antikörpern beschichtet und auf dem Teststreifen aufgetrocknet sind. Die Mischung aus Probe und Farbpartikeln wandert durch Kapillarwirkung entlang der Membran. Bei einem positiven Ergebnis reagieren die spezifischen Antikörper auf der Membran mit dem entstandenen farbigen Konjugat und bilden im Bereich der Testbande eine farbige Bande. Die Mischung wandert weiter entlang der Membran zu der Position der Kontrollbande, an der sich immobilisierter Antikörper befindet. Unabhängig vom Testergebnis erscheint im Bereich der Kontrollbande immer eine grüne Farbbande Das Erscheinen dieser grünen Bande dient als ein Nachweis, dass a ein ausreichendes Volumen pipettiert wurde, die Mischung korrekt gewandert ist sowie als interne Kontrollen für die Reagenzien.

Vorsichtsmaßnahmen

• Nur für den professionellen Gebrauch in der In vitro-Diagnostik.
• Verwenden Sie das Produkt nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr.
• Der Test sollte erst unmittelbar vor der Verwendung aus der Folientasche entnommen werden.
• Verwenden Sie den Test nicht, wenn die Folientasche beschädigt ist.
• Befolgen Sie die Grundsätzen Guter Laborpraxis. Tragen Sie Schutzkleidung und verwenden Sie Einweghandschuhe, Essen, trinken oder rauchen Sie nicht am Arbeitsplatz.
• Alle Proben sollte als mögliche Risikostoffe eingestuft und entsprechend infektiösem Material (Krankheitserregern) behandelt werden.
• Nach der Testdurchführung sollte die Testvorrichtung in einem geeigneten Behälter für biologische Risikostoffe entsorgt werden.
• Die Testdurchführung muss innerhalb von 2 Stunden nach dem Öffnen der versiegelten Folientasche erfolgen.

Lagerung und Stabilität
Lagern Sie das Produkt in der ungeöffneten, versiegelten Folientasche entweder im Kühlschrank oder bei Raumtemperatur (2-30ºC/36-86ºF). Der vorliegende Test ist bis zum Ablauf des auf der versiegelten Folientasche aufgedruckten Verfallsdatums stabil. Der Test darf erst unmittelbar vor Gebrauch aus der versiegelten Folientasche entnommen werden. Frieren Sie das vorliegende Produkt nicht ein.

Enthaltenes Material

• Testvorrichtungen
• Gebrauchsanleitungen
• Probenahmefläschchen mit Puffer

Benötigtes, nicht enthaltenes Material

• Probenahmebehälter
• Einweghandschuhe
• Kurzzeitmesser

Probenahme und Vorbereitung
Nehmen Sie eine ausreichende Menge Fäces-Probe (1-2 g oder ml bei flüssigen Proben). Die Probenahme von Stuhlproben sollte dabei unter Verwendung sauberer und trockener Behälter erfolgen. (Verwenden Sie keine Konservierungsmittel oder Transportmedien.). Bis zur Testdurchführung kann eine Lagerung der Proben für eine Dauer von 1-2 Tagen im Kühlschrank (2-4ºC/36-40ºF) erfolgen. Für eine längere Lagerdauer müssen die Proben bei -20ºC/4ºF eingefroren gelagert werden. Ein wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Proben wird nicht empfohlen. Gefrorene Proben müssen vor der Testdurchführung vollständig aufgetaut, auf Raumtemperatur erwärmt und so gründlich wie möglich gemischt werden.

Verfahren
Bearbeitung der Stuhlproben (siehe Abbildung 1):
Verwenden Sie für jede Probe ein eigenes Probenahmefläschchen. Schrauben Sie den Deckel des Fläschchens ab und stecken Sie den Probenahmestab an verschiedenen Stellen in die Fäces-Probe, um die Probe aufzunehmen (ungefähr 150 mg). Stecken Sie den Probenahmestab mit der Probe in das Fläschchen mit dem Puffer und verschließen Sie das Gefäß. Schütteln Sie das Fläschchen, um eine gute Durchmischung der Probe zu gewährleisten. Nehmen Sie bei der Verwendung flüssiger Stuhlproben die Probe mit Hilfe einer Pipette auf. Pipettieren Sie 150 µl in das Probenahmefläschchen mit dem Puffer.
Testverfahren (siehe Abbildung 2):
Warten Sie mit der Testdurchführung, bis die Testvorrichtungen, die Stuhlproben und der Puffer Raumtemperatur erreicht haben (15-30ºC/59-86ºF). Öffnen Sie die Folientasche erst unmittelbar vor der Testdurchführung.

1. Entnehmen Sie die Salmonella-Testvorrichtung aus der versiegelten Folientasche und verwenden Sie die Testvorrichtung so bald wie möglich.
2. Schütteln Sie das Probenahmefläschchen, um eine gute Durchmischung der Probe zu gewährleisten. Brechen Sie die Spitze des Fläschchens ab.
3. Verwenden Sie für jede Probe eine eigene Testvorrichtung. Geben Sie genau 4 Tropfen in den Probennapf (S). Starten Sie den Kurzzeitmesser.
4. Lesen Sie das Ergebnis 10 Minuten nach der Zugabe der Probe ab.

Abbildung 1

Abbildung 2

Ergebnisauswertung

Abbildung 3

POSITIV: Im zentralen Fenster der Testvorrichtung erscheinen zwei Banden. Im Bereich der Ergebnisbande erscheint eine rote Testbande, die mit dem Buchstaben T gekennzeichnet ist. Im Bereich der Kontrollbande erscheint eine grüne Kontrollbande, die mit dem Buchstaben C gekennzeichnet ist.

NEGATIV: Im Bereich der mit dem Buchstaben C markierten Kontrollbande erscheint nur eine grüne Bande.

UNGÜLTIG: Ein vollständiges Fehlen der grünen Kontrollbande, unabhängig vom Auftreten der roten Testbande. Hinweis: Die Hauptursache für das Fehlen der Kontrollbande ist ein unzureichendes Probenvolumen, eine inkorrekte Testdurchführung oder die Verwendung unbrauchbarer, verdorbener Reagenzien. Überprüfen Sie das Testverfahren und wiederholen Sie den Test unter Verwendung einer neuen Testvorrichtung. Tritt das Problem weiterhin auf, dann verwenden Sie das Test-Kit nicht mehr und kontaktieren Sie Ihren lokalen Vertriebshändler.

Hinweise zur Ergebnisauswertung
Die Intensität der roten Farbbande im Bereich der Ergebnisbande (T) variiert in Abhängigkeit von der Konzentration der Antigene in der Probe. Unter Verwendung des vorliegenden qualitativen Tests können jedoch weder der quantitative Wert noch die Steigerungsrate der Antigenkonzentration bestimmt werden.

Qualitätskontrolle
Der vorliegende Test beinhaltet interne Verfahrenskontrollen:
– Im Bereich der Kontrollbande (C) erscheint eine grüne Bande. Sie zeigt an, dass ein ausreichendes Probevolumen verwendet und der Test korrekt durchgeführt worden ist.

Einschränkungen

• Die Testdurchführung muss innerhalb von 2 Stunden nach dem Öffnen der versiegelten Folientasche erfolgen.
• Ein Probenüberschuss (Überschuss von Stuhlprobe) kann falsche Ergebnisse zur Folge haben. (Es treten braune Banden auf.). Verdünnen Sie die Probe unter Verwendung des Puffers und wiederholen Sie den Test.
• Einige Stuhlproben können eine Verringerung der Intensität der Kontrollbande zur Folge haben.
• Ein wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Proben wird nicht empfohlen und kann falsche Ergebnisse zur Folge haben.
• Ein negatives Ergebnis ist nicht aussagekräftig, da die Möglichkeit besteht, dass der Gehalt von Salmonella in der Stuhlprobe zu gering ist. Die Bestimmung von Salmonella sollte unter Verwendung einer Probe einer Anreicherungskultur erfolgen.
• Der vorliegende Test bietet eine präsumtive Diagnose einer Salmonellose. Die Bestätigung der Diagnose einer Infektion sollte nur durch einen Arzt nach Auswertung aller klinischen Befunde und Laborbefunde erfolgen Die bestätigte Diagnose muss auf der Korrelation der Ergebnisse mit weiteren klinischen Beobachtungen basieren.

Erwartungswerte
Mit einer Inzidenz von 200-500/100 000 Fällen pro Jahr stellen Typhus und Salmonellose in Entwicklungsländern ein öffentliches Gesundheitsproblem dar. Die Übertragung erfolgt durch die bakterielle Kontamination von Wasser oder Nahrung. Tiere und Menschen stellen die hauptsächlichen Erregerreservoire dar.

Leistungsmerkmale
Nachweisgrenze
Die Nachweisgrenze für die unterschiedlichen Serotypen ist nachfolgend angegeben: S. enteritidis 1×10⁴ Bakterien/ml, S. typhimurium 1×10⁴ Bakterien/ml und S. typhi: 1×10⁷ Bakterien/ml.
Sensitivität und Spezifität
Unter Verwendung des vorliegenden Salmonella-Test wurde eine Untersuchung durchgeführt. Unter Verwendung des vorliegenden Salmonella-Tests wurden 40 Stuhlproben analysiert. Die Ergebnisse dieser Untersuchung wurden mit Hilfe von Singlepath®Salmonella bestätigt. Für den Salmonella-Test ergab sich für die Sensitivität ein Wert von >99% und für die Spezifität ein Wert von >97%.
Die für die Herstellung des vorliegenden Tests verwendeten Antikörper erkennen sowohl Salmonella-Epitope, die in Stuhlproben von Patienten nachgewiesen wurden, als auch Epitope aus In vitro-Bakterienkulturen.
Die dargestellten vorläufigen Werte gelten unter Vorbehalt, bis weitere Daten zur Bewertung zur Verfügung stehen.
Kreuzreaktivität
Zur Bestimmung der Kreuzreaktivität des Salmonella-Tests wurde eine Auswertung durchgeführt. Es besteht keine Kreuzreaktivität mit verbreiteten Darmkeimen oder mit abderen in Fäces vorliegenden Organismen und Substanzen in feces: H. pylori, Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes, Campylobacter.

Literatur

• GORDON, M, et al, „Invasive salmonellosis in Malawi“. J Infect Developing Countries 2008; 2(6):438-442.
• SANCHEZ-JIMENEZ, M. et al. „Validation of a PCR for diagnosis of typhoid fever and salmonellosis by amplification of the hilA gene in clinical simples from Colombian patients“, Journal of Medical Microbiology (2004), 53, 875-878.

Qualitätssicherung und Vorkommnisse
Sollten Sie den Eindruck eines Qualitätsmangels haben oder unklare oder ihrerseits falsch-positive oder falsch-negative Ergebnisse erhalten, bitten wir Sie, die betreffende Patientenprobe zurückzustellen und für einen Abruf für uns bereitzuhalten.
Bitte informieren Sie uns umgehend. Sie helfen uns dadurch die Sicherheit der Produkte und damit die Qualität zu gewährleisten.

Hersteller:

Günter Keul GmbH Von-Langen-Weg 10 D-48565 Steinfurt Tel.: 02551/2097  Fax.: 02551/80883 Web: www.keul.de